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细胞的培养方法
人阅读 发布时间：2023-11-28 10:27
人脐带血来源方便，采集容易，对母婴均无伤害。近年来研究表明，脐带血的血浆中富含许多高水平的造血活性物质，具有刺激和促进骨髓造血干/祖细胞增殖、分化和再植能力的功能，是造血生长因子的重要来源。以前认为红细胞、粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等血细胞都属终末分化细胞，很难在体外培养生长或仅能短期培养而不能传代，近年来由于淋巴细胞培养基技术的发展，已有血细胞培养成功的报道，正常血细胞在体外培养生长时间短，只有白血病细胞，血友病细胞、淋巴瘤细胞可培养成功并建立细胞系，但多半为EB等致瘤病毒引起的转化细胞，（EBNA检查阳性），二甲基亚砜（DMSO）处理也可诱导这些细胞分化发生逆转，表现为正常细胞。
所建立的细胞系多半为单核细胞系、B淋巴细胞系、T淋巴细胞系，只在IL-2产品问世后，T细胞才可在体外建系、建株。
血细胞可从外周血中用梯度液通过离心分层后分离获得。也可从脾脏、扁桃体、淋巴结中用机械法切碎过筛分离获得淋巴细胞，从腹腔刺激后的冲洗液中可获得大量的单核-巨噬细胞，从骨髓中可以获得前提血细胞，并可培养生长。加入生长因子或某些物质有利于细胞纯化并促进分化和生长繁殖，例如在淋巴细胞中加入IL-2（TCGF），可促进T细胞生长，建立T淋巴细胞系。在多发性骨髓瘤细胞（B细胞）培养中，加B细胞生长因子，可建立B细胞系；加入IL-6（或正常淋巴细胞培养48h的培养上清中的IL6）可使B细胞在体外培养，建立了IL-6依赖的B9细胞系。在骨髓单个核细胞培养中加入二羟基3,可使单个核细胞分化为成骨细胞及破骨细胞。
脐带血中富含类似于骨髓的造血干细胞，其中CFU-G、BFU-E、CFU-GM近似或高于正常成人骨髓和外周血中的造血干/祖细胞，比骨髓更原始，具有很强的自我复制和再植能力。脐带血中还含有类似于骨髓的基质细胞，对骨髓造血具有支持作用，在体外培养扩增中具有更大的增值能力，是造血干细胞的理想来源，已被应用于Fanconi贫血、某些白血病和恶性肿瘤的治疗，并容易获得骨髓造血功能的重建。
所建立的细胞系多半为单核细胞系、B淋巴细胞系、T淋巴细胞系，只在IL-2产品问世后，T细胞才可在体外建系、建株。
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